VP - Kmenové buňky a regenerativní medicína

Sylabus

* Pondělí

- Úvod do buněčné biologie - tkáňově specifické a kmenové buňky, teorie kmenových buněk, využití buněk ve tkáňovém inženýrství.

- Bezpečnost v laboratoři, sterilní práce s buňkami a tkáňovými kulturami.

- Orientace v laboratoři zpracovávající buněčné kultury - laminární box, centrifuga, inkubátor.

* Úterý

- Embryonální a indukované pluripotentní buňky a jejich využití v medicíně.

Seminář

- izolace MSC z kostní dřeně potkana, ustanovení primokultury rMSC (video s komentářem) (15 min)

- důležité parametry primárních kultur, význam použitých látek a reagencií (medium, FBS, PBS, trypsin), charakteristika MSC (25 min)

Praktické cvičení

- práce ve flow boxu, příprava materiálů pro tkáňové inženýrství (nanovlákna, hydrogely, hydroxyapatit) a rMSC nebo GFP rMSC kultivace buněk (media, pasážování, počítání, mikroskopie...)

- příprava media (15 min)

- kontrola konfluentní kultury (10 min)

- pasážování, počítání buněk (20 min)

- nasazování na kultivační misky (10min)

* Středa

- Hematopoetické kmenové buňky, jejich příprava, zamražování, banka pupečníkové krve a využití v praxi.

- Neurální kmenové buňky, izolace, charakterizace a využití v experimentech.

Seminář 1

- využití biomateriálů pro implantace do modelů míšních poranění implantace biomateriálu do míšní léze (hemisekce) potkana, video s komentářem (30 min)

Seminář 2

- balonková kompresní léze míchy potkana video s komentářem (15 min)

- testy pro hodnocení zlepšení motorických a senzorických funkcí potkana po SCI, video s komentářem (20 min)

* Čtvrtek

- Mezenchymální buňky derivované z kostní dřeně a tukové tkáně.

- Značení kmenových buněk pomocí nanočástic železa a jejich zobrazování in vivo pomocí magnetické resonance.

Praktické cvičení

- mikroskopie a mikrofotografie kultur a případně osídlených vzorků nanovláken a hydrogelů z úterý, pozorování rozdílů (20 min) mikrofotografie nanovláken a cytoskeletu na preparátech (phalloidin, DAPI) (10 min)

- využití softwaru pro analýzu obrazu - Image J (počítání buněk, plochy) demonstrace využití Image J na mikrofotografiích různých hydrogelů, rozdíly (10 min)

- mikrofotografie nanovláken, význam struktury hydrogelů, orientace nanovláken (10 min) stručne konfokální mikroskop, data, 3D obrázky (15 min)

- test (20 min)

* Pátek

- Klinické studie s buněčnou terapií, příprava buněk podle správné výrobní praxe (GMP).

Praktická cvičení Čisté prostory.

Anotace

Embryonální, fetální, mezenchymální a tkáňově specifické kmenové buňky; teoretické základy, vývoj v oboru.

Praktické aplikace kmenových buněk v terapii závažných onemocnění.