Sylabus
Den 1
- úvod
- příprava mikroskopických preparátů z kořenových meristémů (Nicotiana, hybridní rostliny Festuca ´ Lolium: mitotické chromosomy) a prašníků (Arabidopsis thaliana: meiotické chromosomy)
- analýza připravených preparátů pomocí fluorescenčního mikroskopu (výběr vhodných preparátů pro Den 2)
- přímé a nepřímé značení DNA sond a jejich kontrola na agarosovém gelu (amplifikace a telomerové repetice A. thaliana pomocí PCR; značení rDNA repetic a chromosomově-specifických BAC klonů A. thaliana pomocí nick translace; značení genomové DNA pomocí nick translace)
Den 2
- fluorescenční in situ hybridizace (FISH, chromosome painting)/genomická in situ hybridizace (GISH), část I (příprava mikroskopických preparátů pro FISH, příprava hybridizačních sond, hybridizace)
- teoretické a praktické principy fluorescenční mikroskopie, práce s fluorescenčním mikroskopem a příslušným softwarem
- studium meiosy (stádia meiosy analyzována na připravených preparátech pomocí fluorescenčního mikroskopu, digitálně fotografická dokumentace)
Den 3
- FISH, chromosome painting/GISH, část II (odmytí a detekce nepřímo značených DNA sond)
- analýza preparátů pomocí fluorescenčního mikroskopu, digitálně fotografická dokumentace (lokalizace tandemových repetic na chromosomech a v jádrech A. thaliana, chromosome painting: lokalizace BAC klonů A. thaliana na pachytenních chromosomech a v interfásních jádrech - chromosome territories; vyhodnocení výsledků GISH - demonstrace inter-genomových translokací).
- zpracování fotografických výstupů
- závěr a shrnutí
Anotace
Praktické cvičení je zaměřeno na demonstraci klasických i nejmodernějších cytogenetických metod, s důrazem na techniky využitelné v taxonomických, biosystematický a fylogeografických studiích. Absolventi kursu se seznámí s metodikou přípravy mitotických a meiotických chromozomů, počítáním chromozomů, s průběhem meiosy, stejně jako s principy světelné a fluorescenční mikroskopie. Další molekulárně cytogenetické techniky zahrnují barvení
DNA sond, fluorescenční in situ hybridizaci (FISH), genomickou in situ hybridizaci (GISH) a chromosome painting.
Absolventi si osvojí fotografickou dokumentaci chromozomových preparátů a jejich následnou digitální úpravu.