Sylabus
V teoretické části tohoto kurzu budou vysvětleny základní principy metod genového inženýrství a molekulární biologie se zřetelem na úlohy prováděné v praktické části tohoto kurzu, přičemž každý účastník si vyzkouší následující techniky: 1/ Purifikace plazmidové DNA z buněk Escherichia coli pomocí alkalické metody a následná analýza izolované DNA pomocí restrikčních endonukleáz. 2/ PCR amplifikace vybraného genu a jeho následná charakterizace pomocí agarózové elektroforézy. 3/ Chemická transformace bakterií rekombinantním DNA vektorem a výpočet transformační účinnosti, následné pozorován exprese cizorodých bílkovin v kultuře E.coli (proteinová elektroforéza, sledování fluorescence zeleného fluorescenčního proteinu in vivo). 4/ Ve skupině 2-3 studentů - analýza proteinů pomocí elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného (SDS – PAAGE) včetně přípravy vzorků a následného barvení PAAGE gelů Coomassie Brilliant Blue. V případě zájmu (a při dostatku času) bude možno začlenit imuonodetekci proteinů na pevném nosiči, tj. western blot.
V průběhu celého praktika – práce s molekulárně biologickými databázemi, anotace sekvencí nukleových kyselin in silico, návrh primerů apod.
Anotace
Výuka Rozšířeného základního praktika z molekulární biologie se bude konat klasickou prezenční formou za dodržení všech platných nařízení v době konání praktického kurzu. Pokud to nebude možné, výuka praktika se přesune do zkouškového období či jarního semestru nebo proběhne distanční formou.
Kurz se skládá z teoretické a praktické části. Absolvování přednáškových kurzů Základy molekulární biologie, Molekulární biologie, Biologie buňky, Biochemie a Genetika je výhodou, nikoliv však podmínkou.