Sylabus
Během první části kursu se studenti nejprve naučí základním laboratorním úkonům, jako jsou příprava a sterilizace roztoků, pufrů a mikrobiologických médií. Dále se seznámí se základy sterilní práce, inokulací a kultivací mikroorganismů na pevných i v tekutých médiích a sledováním růstové křivky.
V druhé části kursu se studenti naučí metody potřebné pro práci s DNA, jako jsou elektroporace plasmidové DNA do bakterií, její namnožení a preparace z bakterií a elektroforetické ověření izolované plasmidové DNA včetně restrikční analýzy. Takto získaná plasmidová DNA bude použita jako templát pro in-vitro klonování transformační kazety pomocí PCR s primery podle vlastního návrhu. Transformačními kazetami bude poté transformován kvasinkový kmen a úspěšnost připravené genové fúze bude ověřena opět pomocí PCR s primery podle vlastního návrhu.
Třetí část kursu je věnována analýze připravených kmenů. Geneticky modifikované kvasinkové kmeny budou analyzovány pomocí fluorescenčního mikroskopu, spektrofluorimetru a průtokové cytometrie. Pro tyto analýzy bude použito přístrojové vybavení v BIOCEVu ve Vestci u Prahy.
Anotace
POZOR! - z důvodu omezené kapacity kursu může zápis provést pouze vyučující. V případě zájmu o kurs nás neváhejte kontaktovat (zdenap@natur.cuni.cz, kuty@natur.cuni.cz, michal.cap@natur.cuni.cz).
Dvousemestrální praktický kurs oxfordského typu zaměřený na práci s modelovým organismem - kvasinkou
Saccharomyces cerevisiae. V rámci kursu bude každý student řešit vlastní miniprojekt, který spočívá v konstrukci kvasinkového kmene nesoucího v genomu zkoumaný gen fúzovaný se zeleným fluorescenčním proteinem nebo jiným fluorescenčním proteinem a následné analýze tohoto kmene. Kurs je koncipován jako plné seznámení s prací v laboratoři na skutečném projektu. Je tak vhodný i pro studenty bez předchozích zkušeností s laboratorní prací. Studenti, pracující jednotlivě, se v každé etapě experimentální práce nejprve pod odborným vedením seznámí prakticky s potřebnými metodami a následně využijí získané know-how pro samostatné osvojení jednotlivých kroků přípravy vlastního geneticky modifikovaného kvasinkového kmene.
Kapacita kursu je limitována náročností prováděných metod, avšak nízký počet účastníků kursu dovolí maximalizovat individuální přístup a poskytuje dostatečný prostor pro diskusi. Studenti jsou do kursu zapsáni na základě výsledku zájmového testu.