Syllabus
Příklady experimentů: 1) Stanovení koncentrace glykogenu v játrech krysy po hladovění: cílem úlohy je izolovat a stanovit glykogen v játrech krysy. Bude porovnáván obsah glykogenu v játrech dvou jedinců, krysy normálně krmené a krysy krátkodobě hladovějící.
Glykogen bude oddělen od mono- a oligosacharidů a hydrolyzován v kyselém prostředí. Výsledná glukóza bude stanovena spektrofotometricky s využitím enzymatického testu. 2) Izolace rekombinantního proteinu, elektroforéza SDS-PAGE: cílem úlohy je izolovat GST-fúzní protein (14-3-3 nebo beta-galaktozidázu) z bakteriální kultury Escherichia coli.
Rekombinantní GST-fúzní protein bude izolována z bakteriální kultury E. coli pomocí afinitní chromatografie a následně bude kvalita jednotlivých kroků purifikace ověřena pomocí elektroforézy SDS-PAGE. 3) Fosfolipidy v biologických membránách: cílem úlohy je porovnat výrazně odlišné zastoupení fosfolipidů v membránách erytrocytů přežvýkavých a nepřežvýkavých savců. Fosfolipidy budou rozděleny do základních skupin pomocí chromatografie na tenké vrstvě a relativní zastoupení vybraných fosfolipidových druhů bude stanoveno kvantitativně pomocí denzitometrické analýzy obrazu.
Annotation
The course provides a working knowledge of biochemistry, focusing on practical aspects of the field. It covers basic biochemical techniques used in modern experimental biology, e.g. chromatography, spectrophotometry, and electrophoresis applied to the analyses of lipids, carbohydrates, proteins and enzymes in various biological materials.
Students are given the opportunity to perform simple biological experiments independently. General outline for each experiment: The introduction - is organized as interactive seminar to update the theoretical background and practice biochemical computations.
The experiment - is carried out by students independently (2 in a group). The analysis and presentation of data - written report is prepared by the students.
The discussion - interactive seminar to evaluate results and discuss problems. Examples of experiments: 1) Determination of glycogen levels in the mouse liver after starvation. 2) Isolation of recombinant protein, SDS-PAGE electrophoresis. 3) Quantitative analysis of erythrocytes phospholipids in ruminant and non-ruminant mammals.