Sylabus
Přednáška :
1. Vybavení: sterilní místnost, box, laminární box, termostat, CO2 termostat.
2. Materiály a jejich vlastnosti: sklo, polyethylen, polypropylen, polystyren, PVC, teflon, fenolformaldehyd, guma, silikon, kovy, buničina, papír.
3. Voda: znečištěniny, destilace, reversní osmóza, deionizace, aktivní uhlí, sterilizace.
4. Kontaminace.
5. Aseptická technika.
6. Mytí a úprava povrchu.
7. Sterilizace: suché a vlhké teplo, ozáření, filtrace, plyny a páry, desinfekce povrchů.
8. Základní podmínky života: osmolarita, pH, pufrování, CO2, teplota.
9. Média a suplementy: balancované solné směsi, média, glutamin, antibiotika, bikarbonát, sérum, bezsérová média.
10. Typy kultur: tkáňové, buněčné, kmenové buňky, linie, růst a evoluce kultury.
11. Primární kultury: zdroje tkání, fragmenty a suspense.
12. Udržování kultury: subkultura, výměna média, disagregace buněk, klonování, zamražování.
13. Frakcionace a separace buněk.
14. Pozorování a měření: hemocytometr, cell counter, kalibrace, histochemie, pozorování a měření NK (DAPI, Hoechst), viabilita a cytotoxicita (dye exclusion, tetrazoliové soli). Stanovení proteinů (Lowry, Bradfordová, UV), stanovení DNA (DAPI, EtBr), značení živých buněk.
15. Karyologie: příprava roztěrů, barvení, pruhování chromozómů, hybridizace in situ.
16. Transformace buněk: nádorová transformace, kontaktní inhibice, imortalizace kultur, buněčná fúze, transfekce buněk (positivní a negativní selekce, GFP, lipofekce, elektroporace), COS buňky. Praktická cvičení :
1. Příprava primární kultury, příprava média.
2. Udržování kultury: pasážování, zamražování, rozmražování.
3. Klonování v agaru.
4. Karyotyp myši.
5. Kultivace a fixace buněk na skle, imunofluorescenční barvení cytoskeletu buněk. Předmět je vyučován za podpory projektu Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance pro potřeby trhu práce, reg.č. CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362.
Anotace
Přednáškový kurz (1/3) a cvičení (2/3) jsou zaměřeny na získání znalostí pro práci s buněčnými a tkáňovými kulturami živočichů. Důraz je kladen, jak na odborné znalosti, tak na technické vybavení a bezpečnost.
V první části kurzu je probíráno vybavení laboratoře, materiály a jejich vlastnosti, voda, sterilizace, média a suplementy pro živočišné kultury. Druhá část kurzu je zaměřena na založení a udržování kultury včetně disagregace buněk.
Dále pak na frakcionaci buněk, pozorování a měření buněk, stanovení proteinů a DNA, histochemické a karyologické techniky. Součástí kurzu je i transfekce buněk, imortalizace kultur a nádorová transformace.
Praktická cvičení jsou turnusová.