Sylabus
Úloha1: RNA interference embryonálně letálního genu u C. elegans
- seznámení s morfologií C. elegans, princip RNA interference
- in vitro syntéza dsRNA
- příprava nástrojů pro mikroinjekci (kapiláry, podložky pro imobilizaci C. elgens
- seznámení s mikromanipulátorem, vlastní mikroinjekce
Úloha2: Studium migračního potenciálu kmenových buněk
- problematika kmenových buněk
- seznámení se s modelovým organizmem Xenopus tropicalis
- příprava RFP pozitivních Sertoliho kmenových buněk odvozených z varlat X. tropicalis a pěstovaných v buněčné kultuře pro mikroinjekční experiment
- analýza buněk před mikroinjekcí pomocí cell counteru
- příprava médií, kapilár a nástrojů pro mikroinjekci
- mikroinjekce Sertoliho kmenových buněk do pulců X. tropicalis
- light sheet mikroskopie - pozorování a záznam migračních tras mikroinjikovaných buněk
- příprava fotodokumentace.
Předmět je vyučován za podpory projektu Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance pro potřeby trhu práce, reg.č. CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362.
Anotace
Cílem praktik je seznámit studenty s mikroinjekčními a mikromanipulačními technikami na modelu háďátka (C. elegans) a drápatky (X. laevis a X. tropicalis). V kurzu bude taktéž využita light sheet a live cell imaging mikroskopie.