Sylabus
Technika suchých nátěrů, manipulace s laboratorní myší - krevní roztěr, tlustá kapka - nátěry z kultur prvoků (trichomonády) - barvení suchých nátěrů metodou Giemsy-Romanowského - rychlé barvení Dade Diff-Quik - manipulace s laboratorní myší, pasážování Trypanosoma brucei, Plasmodium berghei - zmražovací techniky, kryoprezervace prvoků Fluorescenční barvící metody - vitální barvení acridinovou oranží - jaderné barvení Hoechstem nebo DAPI - fluorescenční sondy citlivé k pH - značení FITC - imunofluorescence Základní kultivační technika - příprava zásobních roztoků antibiotik - izolace axenické kultury Tritrichomonas foetus pomocí migrační rourky - pasážování axenických kultur, zkouška sterility Klonování - izolace klonů zřeďovací metodou (Tetrahymena pyriformis) - izolace klonů metodou mezního ředění (Trichomonas vaginalis) - izolace klonů bičíkovců z čeledi Trypanosomatidae na agarových plotnách Kvantitativní práce s prvoky - práce s Burkerovou počítací komůrkou - výpočet koncentrace buněk - kvantitativní nasazení růstového pokusu - vyhodnocení růstového pokusu ELISA - využití v diagnostice - test na přítomnost protilátek proti Toxoplasma gondii PCR - využití v diagnostice - test na přítomnost lidských patogenů/komensálů - detekce DNA na gelech - elektroforetické metody Příprava a izolace rekombinantního proteinu - práce s bakteriální kulturou, podmínky indukce a exprese cizorodého proteinu - izolace proteinu v nativní a denaturované formě afinitní chromatografií - analýza proteinového vzorku elektroforézou - elektroforetické metody
Experimentální sání na modelu Trypanosoma culicavium – Culex p. quinquefasciatus
-příprava kultury, počítání v komůrce, ředění kultury-deaktivace krve v teplé lázni, příprava krmítka s membránou-sání-pitva dříve nasátých komárů-fixace a barvení pozitivních preparátů
V roce 2020 bude zavedena další úloha týkající se helmintologie.
Anotace
Základní laboratorní kurz seznamující s metodami experimentální biologie specificky používanými v parazitologii i v jiných experimentálních oborech. Předmětem praktik je mj. demonstrace a nácvik kultivačních technik, manipulace s laboratorními hlodavci, axenizace a klonování prvoků, příprava nativních a trvalých preparátů pro diagnostiku a cytologii, izolace DNA, ELISA a PCR v diagnostice, příprava a značení preparátů pomocí nepřímé immunofluorescence, izolace rekombinantních proteinů, elektroforetické metody aj. Předmět je vhodný především pro studenty 3. ročníku bakalářského studia, kteří plánují magisterské studium na katedře parazitologie a ještě nemají extenzivní zkušenosti s prací v laboratoři.
Studenti musí mít během praktika laboratorní plášť a předem se musí seznámit s aktuálními proticovidovými opatřeními na stránce https://www.natur.cuni.cz/fakulta/aktuality/archiv-2020/koronavirus-odkazy-na-oficialni-zdroje-informaci-a-zavazne-pokyny
Pozor: V roce 2021 praktikum zahájí ve středu 6. října.