Sylabus
I. CHEMICKÁ LITERATURA A INFORMACE- primární, sekundární a terciární zdroje informací- Chemical Abstracts, další sekundární zdroje (přehled)- biochemické databáze on-line/off-line, práce s literaturou a informacemi II. ZÁKLADY ANALÝZY A PREZENTACE VÝSLEDKŮ- základy statistického hodnocení výsledků, teoretické a výběrové charakteristiky- základy teorie chyb, grafické vyhodnocování výsledků- zásady přípravy publikací (článek, poster) a vedení protokolůIII. ZÁKLADNÍ TECHNIKY IZOLACE BIOMOLEKUL- zásady plánování a realizace izolace, sledování jejího průběhu- pomocné látky (pufry, voda)- dezintegrace, homogenizace, extrakce, srážení, vsolování a vysolování, centrifugace (frakční, gradientová)- dialýza a ultrafiltrace, lyofilizace a uchovávání preparátůIV. CHROMATOGRAFICKÉ SEPARAČNÍ METODY- obecné principy, teorie a rozdělení metod- protiproudé roztřepávání, kapková chromatografie (DCC)- plynová chromatografie, papírová chromatografie, TLC, HPTLC , kapalinová chromatografie, HPLC, SFC- ionexová chromatografie, chromatofokusace, adsorpční chromatografie- hydrofobní chromatografie, chromatografie s obrácenou fází, afinitní chromatografie, příprava nosičů- gelová chromatografie- frakcionace tokem v poli (FFF)V. ELEKTROMIGRAČNÍ METODY- principy elektromigračních metod- volná a kapilární elektroforéza, elektroforéza na nosičích, SDS PAGE- afinitní elfo, elfo v denaturujícím prostředí- izoelektrická fokusace, izotachoforéza- přenosové (blotovací) technikyVI. IMUNOCHEMICKÉ METODY- princip, příprava protilátek hyperimunizací, monoklonální protilátky , aglutinace a precipitace- radiální imunodifuse jednoduchá, dvojitá- imunoelektroforéza klasická, raketková- imunostanovení a imunometrické metody (RIA, ELISA)VII. ELEKTROANALYTICKÉ METODY- rozdělení a princip elektroanalytických metod- potenciometrie- enzymové elektrody, ISE- měření pH voltametrie, kyslíková elektroda, polarografické metodyVIII. ZÁKLADY PRÁCE S ŽIVÝM BIOLOGICKÝM MATERIÁLEM- práce s laboratorními zvířaty, práce s izolovanými orgány, kultivace tkání a buněkIX. MIKROSKOPICKÉ TECHNIKY - optická mikroskopie- fluorescenční, polarizační mikroskop, fázový kontrast- transmisní elektronová mikroskopie- rastrovací (skanovací) elektronová mikroskopie- příprava mikroskopických preparátů
X. UV-VIS spektroskopie
-elektronová absorpční spektra molekul
-UV-VIS spektroskopie proteinů, NK (fotometrická stanovení proteinů a NK) a malých biomolekul - chromogenní substráty
-derivační a diferenční spektra UV-VIS
Anotace
Úvod do metod biochemického výzkumu, seznámení s jejich teoretickými základy a použitím. Základní chemické a biomedicínské informační zdroje, plánování a dokumentace pokusů, vyhodnocování a prezentace výsledků, etika vědecké práce.
Vybavení biochemické laboratoře, zvláštnosti biologického materiálu a práce s ním. Základní techniky izolace biomolekul - precipitace, vysolování, ultrafiltrace a dialýza, centrifugace. Chromatografické a elektromigrační metody, imunochemické techniky detekce a stanovení biomolekul.
Elektromigrační metody, imunochemie. Základy práce s laboratorními zvířaty, izolovanými orgány, tkáněmi a buňkami.
Principy elektronové a optické mikroskopie. Analytické použití absorpční spektrofotometrie (UV-VIS) a kolorimetrie.
Potenciometrie a voltametrie, měření pH, iontově selektivní elektrody a biosenzory.