V teoretické části tohoto kurzu budou vysvětleny nejen základní principy prováděných metod, ale i jejich výhody a limitace. Studenti též budou seznámeni se správným plánováním vhodného uspořádání experimentů, s vyhodnocováním dat a interpretací výsledků.

Praktická část bude demonstrována především na modelovém reportérovém genu pod kontrolou inducibilního promotoru.

Úlohy:

1/ Příprava pracoviště, laboratorního skla, plastiku a elektroforetických tanků pro práci s RNA. Vysvětlení principů práce s RNA. Izolace celkové RNA, stanovení její koncentrace, analýza pomocí denaturační agarózové elektroforézy, odstranění kontaminující DNA, syntéza cDNA.

2/ Srovnání klasického RT PCR s qPCR, relativní a absolutní kvantifikace transkriptu.

3) Stanovení počtu genových kopií – qPCR (vyhodnocení dat).

4/ Western blot

5/ Měření aktivity luciferázy, zhodnocení růstových vlastností buněk s různou mírou aktivity inducibilního promotoru.