Charakterizace fosfoenolpyruvátkarboxylasy ze semen kukuřice: Vlastnosti fosforylované a defosforylované formy
Abstrakt
Fosfoenolpyruvátkarboxylasa (PEPC, EC 4.1.1.31) ze zralých semen kukuřice (Zea mays L.) byla purifikována do homogenity; výsledná specifická aktivita byla 13.3 μmol min-1 mg-1. Pro studium fosforylace purifikované PEPC byla použita alkalická fosfatasa nebo proteinkinasa A.
V různých reakčních podmínkách byly pro fosforylovanou a defosforylovanou formu PEPC stanoveny kinetické parametry a sledován vliv modulátorů. Defosforylace enzymu způsobila změnu hyperbolické kinetiky na sigmoidální (vůči PEP), doprovázenou sníženou maximální rychlostí reakce a zvýšenou citlivostí vůči inhibici L-malátem.
Působením proteinkinasy A na nativní PEPC přítomnou v suchých semenech ke změně hyperbolické kinetiky nedošlo, změna na sigmoidální kinetiku nastala až po defosforylaci. Stupeň fosforylace PEPC se během klíčení neměnil.