Abstrakt
Syntázy oxidu dusnatého jsou unikátní flavohemoproteiny, které mají různé funkce ve fyziologii savců. Konstitutivní NOS katalýza je iniciovaná rychlým přenosem hydridu z NADPH, následovaná pomalejšími strukturálními přestavbami.
Používáme fotoaktivní nanospínač (NT) ke studiu počátečních přenosů elektronů na FAD v přírodní neuronální NOS (nNOS) katalýze. Molekulární modelování a fluorescenční spektroskopie ukazují, že selektivní vazbou NT na NADPH v místě v blízkosti FAD lze blokovat Phe1395 regulaci.
Je to možné za použití ultrarychlého vstřiku elektronů do elektronových drah proteinu NT fotoaktivací použitím femtosekundového laserového pulsu. Prokazujeme, že kalmodulin nezbytný pro NO syntézu konstitutivní NOS silně podporuje nitromolekulární tok elektronůmechanismem zahrnujícím přenos protonů na redukovaný FAD.
Místně cílená mutageneze s použitím S1176A a S1776T mutant nNOS podporuje tuto hypotézu.