Zlepšení metody vysokovýkonnostní kapalinové chromatografie pro kvantifikaci polyglutamátů metotrexátu v erytrocytech dětí s juvenilní idiopatickou artritidou
Abstrakt
Metotrexát je běžně užívaným lékem k terapii juvenilní idiopatické artritidy. Polyglutamáty metotrexátu jsou jeho aktivními metabolity, které se hromadí v buňkách vč. erytrocytů.
Jejich intracelulární koncentrace může odrážet biologickou dostupnost léku a zároveň sloužit jako bioindikátor pro optimalizaci léčby metotrexátem a monitoraci léku. Tudíž byla vyvinuta jednoduchá a selektivní chromatografická metoda s reverzní fází s fluorescenční detekcí (vlnová délka excitace/emise 370/463 nm) která kvantifikuje sumu všech polyglutamátů metotrexátu po jejich enzymatické konverzi gammaglutamylhydrolázou.
Výsledky této metody (Phenomex GEMINI C18, mobilní fáze s rychlostí 0,6 ml/min, složení (110:890:0.25 v/v) acetonitril, ammonium acetate buffer (0.05 M, pH=5.5), peroxid vodíku 30%) jsou lineární v rozmezí 25-400 nmol/l. Koeficient variace a relativní chyba byla menší než 20%.
Limit detekce a kvantifikace dosahoval 10.9 a 32.9 nmol/l. Metoda je vhodná pro monitoraci koncentrace polyglutamátů metotrexátu v e