Prp45 ovlivňuje přítomnost Prp22 ve spliceosomálních komplexech a účinnost sestřihu nekonsensuálních substrátů
Abstrakt
Prp45 je protein kvasinky, ortoologní lidskémum transkripčnímu koaktivátoru SNW1/SKIP, který je implikován v regulaci transkripce a alternativního sestřihu. Charakterizovali jsme teplotně senzitivní alelu PRP45 za použití techniky syntetické letality, tandemové afinitní purifikace a primer extension sestřihové eseje.
Nalezli jsme, že prp45(1-169) geneticky interaguje se spliceosomalními komponentami SYF1, CLF1/SYF3, NTC20, CEF1, SLU7, PRP17, PRP18 a PRP22. Spliceosomální komplexy purifikované z buněk mutanty prp45(1-169) vykazovaly přítomnost Prp22 ve sníženém množství, což ukazuje na poškození interakce se spliceosomem.
Sestřih kanonického intronu nebyl poškozen, zatímco mutantní introny vykazovaly zvýšenou hladinu lariat-exon2 intermediátu. Domníváme se, že Prp45 přispívá k zdatnosti sestřihu substrátů, které neodpovídají konsensus sekvenci.