Abstrakt
Cílem naší práce bylo vypracovat a optimalizovat protokoly pro izolaci, transport a kultivaci GCs, což umožní sledování změn v morfologii a viabilitě GCs při dlouhodobé kultivaci in vitro. Lidské GCs se získaly od 28 hormonálně stimulovaných žen podstupující in vitro fertilizaci.
Pacientky se stimulovaly 10 000 IU Pregnylu 36 h před odebráním oocytů. Cumulus oophorus s oocytem se odebral transvaginálně a folikulární tekutina (FF) s GCs byla transportována do laboratoře.
Kultivovali jsme GCs v médiu s 2% fetálního telecího séra obohaceném o růstové faktory (EGF, bFGF) a folikuly stimulující hormon (FSH). V průběhu experimentu jsme pozorovali významný vliv jednorázového přídavku FF na proliferaci GCs, umožňujícího získat velké množství GCs s vysokým proliferačním potenciálem. Analýza prokázala, že GCs kultivované in vitro potřebují pro prvních 20 populačních zdvojení 68 - 101 hodin.
Viabilita kultivovaných buněk v proliferační fázi se výrazně neměnila.