Abstrakt
Dívka s těžkou formou neonatálního Marfanova syndromu (MFS) se narodila zdravým rodičům. Mutační screenign pacientčiny DNA odhalil intronickou změnu, deleci 20 bp v intronu 34 (c.4211-32_-13del) v genu pro fibrillin-1 (FBN1).
In silico predikce účinku delece na úrovni pre-mRNA sestřihu ukázala ztrátu jak na 3‘ konci sestřihového místa tak i v oblasti polypyrimidinového traktu. Jelikož nebylo možné provést přímo RT-PCR z pacientčiny RNA, bylo využito metody splicing minigene assay.
Exon 35 byl naklonován společně se sousedními intronovými oblastmi do vektoru pET. Po transfekci linie HeLa buněk pomocí wild-type and mutovaných konstruktů byla izolována celková RNA a proveden RT-PCR.
Výsledky jasně ukázaly, že daná mutace vede k přeskočení exonu 35 ve většině RNA. U pacientky tato splicingová mutace pravděpodobně vedla k deleci 126 nukleotidů z FBN1 mRNA.