Abstrakt
Cíl práce: Sestavení a ověření postupu PCR na průkaz Borrelia burgdorferi v moči pacientů s lymeskou boréliózou (LB). Metodika: Na izolaci DNA z moče byla použita suspenze pryskyřice Chelex 100.
PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace („nested" PCR). Byly použity dvě sady primerů : pro plazmidový gen kódující Osp C protein a pro chromozomální gen kódující 16S rDNA.
Možná přítomnost inhibitorů způsobující falešně negativní výsledky byla kontrolov ána přidáním lidské DNA do reakční směsi a koamplifikací s lidskými genomickými primery. Výsledky: Z 28 vyšetřovaných pacientů byla DNA prokázána u 20 (11 x u neuroboréliózy, 3 x u lymeské arthritidy, 6 x u pacientů suspektních z LB).
Nejvíce pozitivních výsledků bylo dosaženo pro OspC systém (17/20, 85 %), dále pro 16S rDNA systém (7/20, 35 %). Amplifikace s oběma sadami primerů se podařila pouze u 4 pacientů (4/20, 20 %)Závěr: Touto prací jsme ověřili možnost průkazu DNA Borrelia burgdorferi v moči.
Současně se nám potvrdil poznatek pozorovaný i jinými autory, že při DNA diagnostice spirochéty je nutno paralelně užít nejméně dva PCR systémy.