První zkušenosti s průkazem DNA bakterií v mozkomíšním moku u pacientů s hnisavou meningitidou pomocí širokospektré multiplex nested PCR
Abstrakt
Cíl práce: Sestavení a ověření postupu PCR na průkaz Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Listeria monocytogenes, Staphylococcus species, Streptococcus pneumoniae a Neisseria menigitidis séroskupiny B a C z jednoho vzorku mozkomíšního moku u pacientů s hnisavou meningitidou. Materiál a metody: Na izolaci DNA z mozkomíšního moku byl použit QIAamp DNA Mini Kit.
PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace (nested PCR). Pro E. coli, H. influenzae, L. monocytogenes, S. species a S. pneumoniae byly v první reakci použity univerzální a ve druhé druhově specifické primery kódující bakteriální 16S rDNA.
Pro N. menigitidis séroskupiny B a C byl použit amplifikačni systém s primery pro gen SiaD. Výsledky.
Z 25 vyšetřených pacientů na začátku léčby byla DNA bakterií prokázána v mozkomíšním moku u 17 (68 %). Šestkrát se jednalo o N. meningitidis séroskupiny B, 4x N. meningitidis séroskupiny C, 5x S. pneumoniae ,lx H, influenzae a Ix L. monocytogenes. Ze 7 pacientů, u kterých byla antibiotická terapie zahájena před diagnostickou lumbální punkcí, byla PCR pozitivní ve čtyřech případech.
Závěr. Navržený postup nested PCR je rychlejší než klasická kultivace a hodí se pro včasnou laboratorní diagnostiku infekčního agens. v porovnání s kultivací poskytuje technika mírně vyšší pozitivitu (o 16 %), podobně je tomu i u vzorků vyšetřených po nasazení antibiotické terapie.
Metodou PCR nebyla nikdy prokázána jiná bakterie než ta, která byla vykultivována.