Abstrakt
Cíl práce: Ověření postupu PCR diagnostiky na průkaz Borrelia burgdorferi sensu lato u nervových a kožních forem lymské boreliózy. Metodika: Na izolaci DNA z plazmy, moče a mozkomíšního moku byl použit QIAamp DNA Mini Kit.
PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace (nested PCR). Každý biologický materiál byl testován paralelně pomocí pěti amplifikačních systémů:dva primery byly specifické pro plazmidové geny kódující OspA a OspC protein a tři pro chromozomální geny kódující 16S rDNA, flagelin a p66 protein.
Výsledky: Z 56 pacientů s neuroboreliózou byla DNA prokázána před léčbou u 41 (77,4 %), 48 pacientů s kožní formou bylo pozitivních ve 26 případech (54,2 %). Po léčbě byla DNA detekována u 22 pacientů s neuroboreliózou (41,5 %).
U kožní formy pozitivita přetrvávala u 16 (38,1 %). Po třech měsících bylo celkem pozitivních ještě 23 (28,7 %) pacientů, a po šesti měsících 6 (9,5 %) Nejvíce pozitivních výsledků bylo dosaženo pro 16S rDNA systém, o něco nižší citlivost byla zachycena s primery pro OspA, OspC a flagelin, nejnižší vykazoval p66 systém.
Závěr: Metodika prokázala přítomnost DNA ve všech vyšetřovaných biologických tekutinách u obou forem lymské boreliózy. Pro klinické použití stanovení DNA lze doporučit vyšetření minimálně dvou cílových sekvencí.