Abstrakt
Úvod a cíl práce: Cílem předkládané studie je ověřit reakci kmenových buněk zubní dřeně na přítomnost kyseliny hyaluronové v kultivačním médiu a posoudit tak možný vliv scaffoldů z kyseliny hyaluronové na kmenové buňky zubní dřeně. Metodika: V experimentu byly použity 2 linie kmenových buněk zubní dřeně (KBZD).
Buňky byly kultivovány ve standardním kultivačním médiu s přídavkem 0,1 % kyseliny hyaluronové (KH) ve třech různých molárních hmotnostech: médium 1: 0,116 MDa, médium 2: 0,54 MDa, médium 3: 1,5 MDa. Pro stanovení kvantitativních parametrů a viability buněk jsme použili přístroje Vi-Cell XR a Z2 Counter.
Výsledky: Enzymatickou disociací zubní dřeně jsme izolovali 2 linie KBZD. V průběhu dlouhodobé kultivace jsme prokázali fenotyp typický pro kmenové buňky zubní dřeně (vysoká pozitivita pro CD13, CD29, CD44, CD90 a OCT3/4), schopnost KBZD překročit Hayflickův limit a diferencovat v osteogenní a chondrogenní tkáně.
Během experimentu KBZD linie 1 dosáhly v pořadí kontrola/ médium 1/ médium 2/ médium 3 celkem 14,1/15,3/15,4/14,8 populačních zdvojení, průměrný doubling time ve stejném pořadí byl 32,4+-3,0/29,1+-0,9/29,6+-1,8/30,9+-1,7 hodin. Viabilita KBZD získaných ze 7. pasáže byla 92,3/93,1/91,8/92,6 %.
KBZD linie 2 dosáhly v pořadí kontrola/ médium 1/ médium 2/ médium 3 celkem 16,7/17,2/16,7/16,8 populačních zdvojení, průměrný doubling time ve stejném pořadí byl 29,1+-4,1/28,0+-3,1/29,4+-5,5/29,0+-3,9 hodin. Viabilita kmenových KBZD ze 7. pasáže byla 80,1/82,5/81,8/80,9 %.
Závěr: Ověřili jsme, že KBZD v přítomnosti KH o molekulárních hmotnostech 0,116, 0,54 a 1,5 MDa přežívají, proliferují a udržují si schopnost diferencovat ve zralé buněčné elementy. Dále jsme ověřili původní předpoklad, že nízkomolekulární forma kyseliny hyaluronové bude mít vyšší dopad na fenotyp kmenových buněk zubní dřeně než forma vysokomolekulární.
Prokázali jsme, že kyselina hyaluronová je využitelná v tkáňovém inženýrství jako materiál pro tvorbu scaffoldů.