Antigen mixVP1-BKV1, chimérický protein odvozený od kapsidových proteinů myšího polyomaviru a lidského polyomaviru BK subtypu BKV-I pro testování výskytu typově specifických protilátek
Abstrakt
Antigen mixVP1-BKV1 byl vyvinut pro imunodetekci protilátek specificky namířených proti BKV, subtypu I, v krevním séru a plazmě. Antigen mixVP1-BKV1 je tvořen rekombinantním chimérickým proteinem odvozeným od kapsidových proteinů VP1 myšího polyomaviru (MPyV) a lidského polyomaviru BK, subtypu BKV-Ia (Dunlop / kmen Gardner).
Sekvence chimérického VP1 genu byla vytvořena na základě bioinformatické analýzy sekvencí VP1 genů MPyV (GenBank: AAL35610.1) a BKV subtypu I (GenBank: AEK21505.1). Konkrétně byla v genu VP1 MPyV vyměněna oblast tzv.
BC smyčky, která mapuje aminokyselinové zbytky 55 až 105. Nově vzniklý gen odvozený od MPyV kódoval tu variabiln í oblast VP1 proteinu subtypu BKV I, která je zodpovědná za interakci s neutralizačními (subtypově specifickými) protilátkami.
Gen pro chimérický antigen mixVP1-BKV1 byl použit pro přípravu rekombinantního bakuloviru a následnou produkci antigenu v bakulovirovém expresním systému. Antigen mixVP1-BKV1 byl izolován z hmyzích buněk pomocí ultracentrifugace v třístupňovém gradientu sacharózy.