Nový metodický přínos k diagnostice autoinflamatorních onemocnění: cytometrické stanovení intracelulární produkce prozánětlivých cytokinů
Abstrakt
Tato práce popisuje zavedení a optimalizaci metody umožňující analýzu produkce prozánětlivých cytokinů buňkami vrozené imunity. Diagnos-tika autoinflamatorních onemocnění, jako jsou familiární středozemní horečka (Familial Mediterranean Fever, FMF), syndrom Schnitzlerové či hyper IgD syndrom (HIDS), imunodysregulačních a autoimunitních onemocnění s autoinflamatorní složkou, je často složitá pro nespecifický klinický obraz.
Přesná diagnóza je možná až genetickým vyšetřením, které však není u všech pacientů průkazné a u některých onemocnění ani není genetický původ znám. Nejasnosti v diagnostice onemocnění a rozlišení patogenetických pochodů u konkrétních pacientů ztěžují či zcela znemožňují nastavení cílené terapie, která v současné době zahrnuje i možnosti specifické blokády jednotlivých prozánětlivých cytokinů.
Z tohoto důvodu jsme se zaměřili na zavedení, nastavení a optimalizaci metody, která by umožnila rychle a ekonomicky v malém množství lehce dostupného biomateriálu (periferní krve) odhalit aberantní produkci vybraných prozánětlivých cytokinů, a přispěla by tak ke správné diagnostice a výběru vhodné terapie. Produkce základních prozánětlivých cytokinů (IL-1β, IL-6, TNFα) tvořených zejména monocyty po stimulaci lipopo-lysacharidem (LPS) byla v práci testována pomocí dvou rozdílných metod - průtokovou cytometrií detekující intracelulární produkci cytokinů a metodou ALBIA (Addressable Laser Bead Immuno Assay) - Luminex, která umožňuje stanovení množství cytokinů uvolněných do superna-tantu.
Na zdravých dárcích byla optimalizována délka stimulace, koncentrace LPS a čas zastavení uvolňování cytokinů z buněk Brefeldinem A.