Modifikované elektroforetické a digestivní podmínky dovolují zjednodušené hmotnostne spektrometrické určení disulfidických vazeb
Abstrakt
Správné vytvoření disulfidických můstků v proteinech je předpokladem pro jejich stabilitu a funkci. Informace od charakteru disulfidů může tudíž sloužit jako indikace správného sbalení rekombinantních proteinů a též může být užita při homologním modelování proteinů pro účely zdokonalení struktur.
Manipulace s proteiny a diegsce při bazickém pH vede k přeskupení disulfidické vazby. Zde ukazujeme kompletní vzorový protokol který umožňuje zpracování proteinů obsahujících disulfidy za bazického pH.
Modifikovali jsme standardní SIDS gelovou elektroforézu a podmínky proteinové digesce přidáním oxidačního agens cystaminu. Tato modifikace zabraňuje přeskupení disulfidů, které jsme jinak pozorovali ve vzorcích s nimiž bylo zacházeno dle obecného protokolu.
Slepičí lysozym byl užit jako modelový protein při vývoji této metody.