Stanovení polyglutamátů methotrexátu v erytrocytech u dětí s juvenilní idiopatickou artritidou metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
2009
Abstrakt
Pro účel terapeutického monitorování celkové koncentrace polyglutamátů methotrexátu v erytrocytech byla zavedena izokratická metoda kapalinové chromatografie na reverzní fázi s fluorescenční detekcí (excitační/emisní vlnová délka 370/436 nm). Polyglutamáty jsou stanovovány jako suma jednotlivých forem po enzymatické konverzi gama-glutamylhydrolázou na methotrexát.
Separace je prováděna na koloně Phenomenex GEMINI C18 při průtoku 0.6 mL/min s mobilní fází acetonitril:octan amonný (0.05M, pH=5.5): 30% peroxid vodíku (110:890:0.25 v/v). Metoda je lineární v rozsahu 25-400 nmol/L.
Přesnost a správnost metody je lepší než 20%. Dosažená mez detekce a mez stanovitelnosti jsou 10.9 a 32.9 nmol/L